Metodica n° 16: Influenza della temperatura sull’attività dell’enzima amilasi
Metodica di laboratorio
- Materiale occorrente:
- sospensione di amido 1% (1 g di fecola di patata in 100 mL di acqua distillata bollente; la soluzione viene precedentemente preparata dall’insegnante o dal personale di laboratorio);
- reattivo di Lugol;
- soluzione di amilasi 1%;
- ghiaccio;
- bagnomaria a diverse temperature (piastra riscaldante e beker con bagnomaria per provette);
- pozzetti per saggi;
- pipetta Pasteur;
- provette e portaprovette;
- pipetta graduata da 10 mL;
- termometro -10°C/100°C;
- Valutazione dei rischi: indossare guanti, camice e occhiali.
Procedimento:
Tutti i gruppi (da 3 persone) effettuano la prova a temperatura ambiente e:
- il gruppo 1 anche a 0°C (acqua e ghiaccio);
- il gruppo 2 anche a 40°C;
- il gruppo 3 anche a 60°C;
- il gruppo 4 anche a 80°C.
Per ogni saggio:
- Alla propria postazione di laboratorio preparare il bagnomaria o il bagno a ghiaccio secondo le indicazioni ricevute; utilizzare il termometro per registrare la temperatura.
- Mentre si attende il raggiungimento della temperatura indicata, prelevare con una pipetta graduata 5 mL di sospensione di amido e metterli in una provetta; prelevare 5 mL di soluzione di amilasi con una seconda pipetta graduata e porli in una seconda provetta.
- Inserire entrambe le provette nel bagno alla temperatura prevista per almeno 5 minuti, ovvero fino a quando la temperatura sarà stabilizzata.
- Preparare i pozzetti introducendo in ogni pozzetto una goccia di reattivo di Lugol.
- Stabilizzate le temperature, mescolare il contenuto delle due provette mantenendo la provetta di reazione nel bagno alla temperatura prevista.
- Prelevare una goccia dalla provetta in cui si sono mescolate le soluzione di amido e amilasi e porla a reagire sul primo pozzetto (tempo 0) con il Lugol.
- Prelevare a intervalli regolari di 1 minuto una goccia dalla provetta di reazione (che rimane nel bagno a temperatura prevista) e porla in un nuovo pozzetto contenente il reattivo di Lugol.
- Continuare fino a comparsa del saggio negativo per la presenza di amido (assenza del viraggio del reattivo di Lugol dal bruno al nero viola) e annotare il tempo trascorso.
N.B. La prova a temperatura ambiente va condotta come descritta nella metodica senza necessità di termostatare.