Valutazione dei rischi:

Alcol etilico: liquido e vapori facilmente infiammabili, provoca grave irritazione oculare – utilizzare guanti, camice e occhiali – usare lontano da fonti di calore, superfici calde, scintille, fiamme libere o altre fonti di accensione.

Procedimento:

Step 1
Mettere sulla piastra termica un becher contenente acqua e fare riscaldare fino a raggiungere circa 60°C.

Step 2
Tagliare la banana a piccoli pezzi, metterne uno in un mortaio e schiacciarlo con il pestello per circa 2 minuti fino a trasformarlo in una poltiglia.

Serve per separare meccanicamente le cellule tra loro e rompere le pareti cellulari, fatte di cellulosa e pectina, esponendole così all’azione della soluzione di estrazione.

Step 3: Preparazione della soluzione di estrazione
Per estrarre il DNA è necessario demolire le membrane cellulari e quelle del nucleo, costituite da fosfolipidi, molecole ricche di grassi; i fosfolipidi reagiscono con il detersivo e quindi le membrane si rompono causando la fuoriuscita di DNA e RNA. Il sale e l’acido hanno la funzione di denaturare le proteine, quindi facilitare l’eliminazione delle proteine sulle quali è avvolto il DNA, ovvero gli istoni.

Una volta ottenuta la poltiglia, aggiungere nel mortaio un pizzico di sale, un cucchiaino da caffè di succo di limone e 3 gocce di sapone liquido.

Step 4: Estrazione del DNA
Aggiungere alla soluzione di estrazione 4 cucchiaini di acqua calda (60°C circa). Mescolare la soluzione per uniformare la temperatura e omogeneizzarla il più possibile, ponendo attenzione a non produrre bolle.

Aumentando la temperatura del miscuglio, circa 60°C, viene favorito il processo per demolire le membrane nucleari e cellulari e liberare il DNA. Tuttavia, la permanenza per lungo tempo a temperatura così elevata potrebbe degradare anche il DNA, frammentandolo. Quindi, dopo circa 15 minuti, bisogna raffreddare la poltiglia aggiungendo acqua molto fredda.

Schiacciare la banana con il liquido ottenuto, per circa 2 minuti. Passato il tempo, si procede alla filtrazione.

Step 5: Filtrazione
Con questa operazione si raccoglie il liquido ricco di DNA, separandolo dai residui cellulari e dagli altri tessuti di banana che vanno scartati.

Con la spatolina prelevare, poco alla volta, la poltiglia e il liquido ottenuti e porli sul filtro di carta/garza posto dentro l’imbuto (messo sulla beuta di vetro) per effettuare la filtrazione. Tramite la spatolina, mescolare con cura per favorire la filtrazione. ATTENZIONE a non fare fuoriuscire dal filtro il miscuglio.

Ottenuto solo il filtrato, travasarlo in una provetta e aggiungere con la spruzzetta una quantità uguale di acqua molto fredda.

Step 6: Evidenziamento del DNA
Il DNA è molto solubile in acqua, dove è invisibile, invece in alcol è insolubile, quindi precipita e si rende visibile sotto forma di filamenti biancastri.

Aggiungere l’alcol freddo facendolo colare lentamente sul bordo della provetta in modo che formi uno strato sopra alla soluzione filtrata (fino a 1-2 volte il volume iniziale).

Non spostare la provetta e lasciare agire, senza agitare per 5 minuti, per consentire al DNA di raccogliersi. All’interfaccia fra alcol e il sottostante filtrato si può osservare una sostanza biancastra la cui quantità tende ad aumentare: il DNA precipitato.